血清、血漿、細胞裂解液等生物標本處理

樣本存放和穩定性：

樣本在2-8度條件下，是可以儲藏72h，在-20度或-80度是可以儲藏半年以上。樣本收集后，并非一次檢測完，請按照一次用量分開包裝凍存，防止反復凍融。

血清：將收集的康那動物血清分離管的全血標本在室溫置放0.5-2小時或4度過夜，隨后1000×g離心20min，取上清就可以，或將上清置于-20度或-80度存放，但應盡量避免反復凍融。

血漿：用EDTA或肝素做為抗凝劑采集標本，并把標本在采集后的30分鐘內于2-8度1000×g離心15min，取上清就可以檢測，或將上清置于-20度或-80度存放，但應盡量避免反復凍融。

組織勻漿：用預冷的PBS(0.01M,pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果），稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應9mL的PBS，具體體積可根據實驗需要適當調整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）添加玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。以便進一步裂解組織細胞，能夠對勻漿液進行超聲破碎，或反復凍融。最后將勻漿液于5000×g離心5~10min，取上清就可以檢測，或將上清置于-20度或-80度存放，但應盡量避免反復凍融。

細胞裂解液：吸棄培養液，用PBS（0.01M，pH7.4）將細胞洗一遍。用細胞刮刮下細胞（不能用胰酶和EDTA處理），添加2-5mLPBS（0.01M，pH7.4）。懸浮細胞可省略。收集細胞懸液，4度1000×g離心10min，棄去培養基，用預冷的PBS潤洗3次。加入適量的預冷PBS或非變性細胞裂解液（臨用前添加蛋白酶抑制劑）重懸細胞,通常6孔板一個孔的細胞量需要150-250μLPBS重懸。將樣品放置-20度或-80度，使樣品冷凍，再放室溫解凍樣品，反復凍融3次，使細胞充分裂解,也可將樣品進行超聲破碎，從而達到裂解的目的。4度10000×g離心10min，除去細胞碎片，取上清就可以檢測，或將上清置于-20度或-80度存放，但應盡量避免反復凍融。

細胞培養物上清或其它生物標本：請1000×g離心20min，取上清就可以檢測，或將上清置于-20度或-80度存放，但應盡量避免反復凍融。

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